大腸菌群細菌多存在于溫血動物糞便、人類經(jīng)?;顒拥膱鏊约坝?/span>糞便污染的地方,人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。大腸菌群是評價食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。而檢測食品中大腸菌群的方法中,國內(nèi)采用的進出口食品大腸菌群檢測方法主要有國家標(biāo)準,國家標(biāo)準的三步九管法,即乳糖發(fā)酵試驗、分離培養(yǎng)、證實試驗。
由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細菌,即:需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進行。
1.乳糖發(fā)酵試驗:樣品稀釋后,選擇三個稀釋度,每個稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察是否產(chǎn)氣。
2.分離培養(yǎng):將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍瓊脂平板上,36±1℃培養(yǎng)18-24h,觀察菌落形態(tài)。
3.證實試驗:挑取平板上的可疑菌落,進行革蘭氏染色觀察。同時接種乳糖發(fā)酵管36±1℃培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況。
在乳糖發(fā)酵試驗工作中,經(jīng)??梢钥吹皆诎l(fā)酵倒管內(nèi)極微少的氣泡(有時比小米粒還?。袝r可以遇到在初發(fā)酵時產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。實驗表明大腸菌群的產(chǎn)氣量,多者可以使發(fā)酵倒管全部充滿氣體,少者可以產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。
在試驗過程中,會用到高壓滅菌器來進行滅菌,九管法滅菌時,大腸菌在高溫下會產(chǎn)生氣泡,如果用的是ALP高壓力滅菌鍋,可以通過進入工程師菜單,調(diào)整在升溫過程中的排氣時間,可以有效的排走殘留在培養(yǎng)基中的氣泡。
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